产品货号：
GS5302
中文名称：
猪源性DNA残留检测试剂盒
英文名称：
Pig-Derived DNA Residue PCR Kit
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
适用机型：
包含但不限于以下仪器：
Bio-Rad:CFX96.
Thermo Scientific:ABI 7500;ABI Quant Studio 5;ABI Step OnePlus.
SLAN-96H.
使用方法：
相关搜索：猪源性DNA残留检测试剂盒，猪源性DNA检测，Pig-Derived DNA Residue PCR Kit
本试剂盒可用于生物制品的中间品、半成品和成品中的猪源性成分的检测。本试剂盒以猪源性基因组高度保守区设计特异性引物和探针，反应体系中含有猪源性基因组模板，可以进行PCR扩增并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时检测和输出，实现检测结果的定性分析。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| qPCR Mix | 1mL |
| 猪源性qPCR引物混合液 | 900μL |
| 阳性参考品 | 100μL |
| DNA稀释液 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
注意事项：
- 所有操作严格按照说明书进行，PCR操作各阶段应严格分区操作，避免交叉污染。
- 样本处理过程中需使用无菌无酶的耗材。
- 每次实验均需设置阴、阳对照组。
- 试剂盒内的组分使用前需充分溶解混匀。
- 禁止在试剂准备区稀释标准品添加阳性质控品和样本。
- 操作人员需带口罩、帽子、手套等，在无菌条件下操作，避免外界细菌污染，导致假阳性结果。
- 扩增后的产物需进行无害化处理方可丢弃。
适用机型：
包含但不限于以下仪器：
Bio-Rad:CFX96.
Thermo Scientific:ABI 7500;ABI Quant Studio 5;ABI Step OnePlus.
SLAN-96H.
使用方法：
- 猪源性定量阳性参考品的稀释和标准曲线的制备
用试剂盒中提供的DNA稀释液将猪源性定量阳性参考品(浓度为3ng/μL)进行梯度稀释，稀释浓度依次为300pg/μL、30pg/μL、3pg/μL、300fg/μL，30fg/μL。具体操作如下：- 将试剂盒中的猪源性定量阳性参考品和DNA稀释液置于冰上，待完全融化后，轻微振荡混匀，短暂离心将液体甩至管底；
- 取5支干净的1.5mL离心管，分别标记为S1、S2、S3、S4、S5；
- 在S1、S2、S3、S4、S5管中分别加入90μL DNA稀释液；
- 按下表依次进行5次稀释操作，每次稀释后确保充分混匀后再进行下一个梯度的稀释。如先取10μL猪源性定量阳性参考品加入步骤3准备好的S1管中，轻微振荡充分混匀，短暂离心将液体甩至管底；然后再取10μL S1中的标准品加入步骤3准备好的S2管中……依次稀释。
标准品梯度 稀释过程 浓度 S1 90μL DNA稀释液+10μL猪源性定量阳性参考品 300pg/μL S2 90μL DNA稀释液+10μL S1 30pg/μL S3 90μL DNA稀释液+10μL S2 3pg/μL S4 90μL DNA稀释液+10μL S3 300fg/μL S5 90μL DNA稀释液+10μL S4 30fg/μL - 每个浓度做3个复孔，该试剂可测试30fg/μL～300pg/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
- 为减少反复冻融次数和避免污染，建议初次使用时将DNA定量阳性参考品分装储存于-20℃。
- 已融化未使用的DNA稀释液可保存于2～8℃ 7天，若长时间不用，请放置于-20℃。
- 为确保模板完全混匀，每个梯度稀释时需轻微震荡混匀约1分钟。
- 每个浓度做3个复孔，该试剂可测试30fg/μL～300pg/μL线性范围。若需要，可适当扩大或缩小线性范围。
- 将试剂盒中的猪源性定量阳性参考品和DNA稀释液置于冰上，待完全融化后，轻微振荡混匀，短暂离心将液体甩至管底；
- 阴性质控品的准备
取100μL样本基质溶液(或DNA稀释液)加入1.5mL干净的离心管中，标记为阴性质控NCS。阴性质控NCS可和同批待测样本一起进行样本前处理，制备成阴性质控NCS纯化液。 - qPCR反应液的制备
- 试剂配制(试剂准备区)
解冻反应所需的各种试剂，充分混匀后顺时离心。按下表顺序在冰浴中配制反应体系。如需同时进行多个反应，可将表中所有溶液和酶提前混合均匀，短暂离心后再分装到各反应管。配制多个反应时，建议按反应数+1配制体系。成分 用量 qPCR Mix 10μL 猪源性qPCR引物混合液 9μL 阴性对照可同时配制。 - 样品处理与加样(样本处理区)
提取DNA(建议使用商品化提取试剂盒)，提取过程中应避免污染。然后将提取的DNA和阳性参考品各取1μL，分别加入对应
的反应管中，总体积为20μL。混匀、瞬时离心。 - qPCR扩增(样品扩增区)
将上述配制好的反应体系置于荧光PCR仪反应槽中，按下表进行设置反应程序。步骤 温度 时间 循环数 UDG消化 50℃ 2min 1 预变性 95℃ 10min 1 变性 95℃ 10s 45 退火/延伸/检测荧光 60℃ 30s - 以ABI公司7500 qPCR仪为例：设置好通道、样品信息，反应体系设置为20μL；
- 荧光通道选择：检测通道(Reporter Dye)FAM，淬灭通道(Quencher Dye)none，请勿选择ROX参比荧光；
- 将板上标准品对应的孔选择为S分别赋值为300、30、3、0.3、0.03(单位为pg/μl)，并且在相应的Sample Name一栏中命名为S1、S2、S3、S4、S5；NTC选择N，NCS和待测样品孔选择为U，并且在相应的Sample Name一栏中命名为NTC、NCS、S1、S2、S3、S4、S5。
- 以ABI公司7500 qPCR仪为例：设置好通道、样品信息，反应体系设置为20μL；
- 试剂配制(试剂准备区)
- 结果分析
- 试剂盒有效性判定
- 阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤ 35。
- 阴性对照：Ct值> 38或无Ct值，线性为直线或轻微斜线，无指数增长期。
- 阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤ 35。
- 样本结果判定
- 阳性：扩增曲线呈S型，且检测通道Ct值≤ 35，曲线有明显的指数增长期。
- 可疑：扩增曲线呈S型，且检测通道35
- 阴性：样本检测结果Ct值> 38或无Ct值。
- 阳性：扩增曲线呈S型，且检测通道Ct值≤ 35，曲线有明显的指数增长期。
- 试剂盒有效性判定
- 检测方法局限性
- 待检样本浓度过低时(低于最低检出限)可能会造成假阴性结果。
- 待检样本在采集、运输、储存以及操作过程中处理不当容易造成核酸降解而产生假阴性结果。
- 待检样本在采集、运输、储存以及操作过程中处理不当容易造成交叉污染而造成假阳性结果。
- 待检样本浓度过低时(低于最低检出限)可能会造成假阴性结果。
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